Oksijen endükte retinopati in vivo fare modelinde intravitreal matrine enjeksiyonunun retinal endotelyal hücre proliferasyonuna, retina morfolojisine ve apoptotik hücre ölümüne etkisi

Abstract

Bu çalışmada in vivo oksijen endükte retinopati fare modelinde intravitreal matrine enjeksiyonunun farklı konsantrasyonlarda retinal endotelyal hücre proliferasyonuna, retina morfolojisine ve apoptotik hücre ölümüne etkisi incelendi. Onsekiz adet C57BL/J6 fare postnatal 7-12. günler arasında %75 2 oksijene tabi tutuldu. Fareler 4 gruba ayrıldı. Grup-A negatif kontrol grubu (n: 10 göz), Grup-B kontrol grubunu ( n:18 göz) , Grup-C 0.78 μg intravitreal matrine enjeksiyonunu ( n: 9 göz), Grup-D 6.25 μg intravitreal matrine enjeksiyonunu (n: 9 göz) oluşturdu. Onikinci gün 9 farenin bir gözüne (Grup-C) 0.78 μg intravitreal matrine (IVM), 9 farenin bir gözüne (Grup-D) 6.25 μg IVM enjekte edildi. Farelerin diğer gözlerine 1μl steril izotonik solüsyon enjekte edildi (Grup-B). Beş tane yaş uyumlu işlem görmemiş, oda ortamında tutulmuş fare (Grup-A) negatif kontrol grubunu oluşturdu. Postnatal 17. gün fareler sakrifiye edildi ve gözler preretinal neovaskülarizasyonun kantitatif analizi, apoptotik hücre ölümü ve morfolojik yapı incelenmesi için enüklee edildi. Neovaskülarizasyon internal limitan membranın vitreusa bakan yüzeyindeki vasküler hücre çekirdeklerinin sayımıyla kantifiye edildi. Histolojik ve ultrastrüktürel bulgular ışık ve elektron mikroskopi, apoptotik aktivite terminal deoxynucleotidyl transferase deoxy-UPT-nick end labeling (TUNEL) yöntemi ile incelendi. Grup-C (p<0.0001) ve –D‘de (p<0.0001) bir histolojik kesitte tespit edilen neovasküler hücre çekirdeği sayısı Grup-B ile karşılaştırıldığında istatistiksel anlamlı fark bulundu. Grup-C ve -D arasında anlamlı fark (p=0.9) tespit edilmedi. Grup-A, Grup-B (p<0.0001) ile karşılaştırıldığında anlamlı fark görüldü. Grup-B ile karşılaştırıldığında Grup-C‘de endotelyal hücre çekirdeği sayısının %95 ve Grup-D‘de %100 azaldığı tespit edildi. Histolojik incelemede matrine enjekte edilmiş olan gözlerde retinanın tüm katmanlarında hücre kaybı ve tabakaların incelmesi, tüm kesitlerde doku bütünlüğünün bozulduğu görüldü. Ultrastrüktürel mitokondriyal değişiklikler matrine enjekte edilen gruplarda (Grup-C, -D) yoğun olarak tespit edildi. İncelemede Grup-B‘de tespit edilen atipik mitokondri sayısı Grup-C (p=0.01) ve -D (p=0.01) ile karşılaştırıldığında anlamlı fark bulundu. Grup-A, iv Grup-B, -C, ve -D ile karşılaştırıldığında anlamlı fark bulundu (p<0.0001). Grup-C ve -D arasında (p=0.4) anlamlı fark tespit edilmedi. TUNEL tekniği ile apoptozis analizinde Grup-A ve Grup-B‘de dış nükleer tabakada ve iç nükleer tabakada benzer düzeyde apoptotik TUNEL-pozitif hücre tespit edildi. Grup-C (p=0.9) ve -D (p=0.9) Grup-A ve Grup-B ile karşılaştırıldığında anlamlı fark görüldü. Grup-C ile -D (p=0.7) arasında anlamlı fark bulunmadı. Sonuç olarak matrine oksijen endükte retinopati modelinde neovaskülarizasyonu güçlü baskılmaktadır. Histolojik incelemede toksik etki, TUNEL çalışmasında artmış apoptotik aktivie tespit edildi. Bununla ilgili ilaç etkisi ve doz etkisi ile ilgli prospektif randomize kliniğe yönelik deneysel çalışmalar gerekmektedir.